СОДЕРЖАНИЕ стр. Список сокращений ВВЕДЕНИЕ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Использование Ti-плазмид агробактерий в генетической инженерии 1.1.1. Краткая характеристика Agrobacterium tumefaciens 1.1.2. Cоздание векторов на основе Ti-плазмид 1.1.3. Процессинг тДНК в бактериальной клетке и ее перенос в клетки растений 1.1.4. Разработка система трансформаций растений с помощью Agrobacterium tumefaciens 1.1.5. Проблема сохранения чужеродных генов, перенесенных в растение 1.1.6. Анализ экспрессии чужеродных генов в трансформированных растениях 1.2. Использование метода генетической инженерии для трансформации однодольных растений 1.2.1. Краткие характеристики ряски 1.3. Сигнальные молекулы, их способность индуцировать процессинг тДНК 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 2.1. Материалы 2.1.1. Оборудование 2.1.2. Бактериальные штаммы и плазмиды 2.1.3. Растения 2.1.4. Среды микробиологические для культивирования растений 2.1.5. Другие растворы 2.1.6. Ферменты, используемые в генной инженерии 2.1.7. Антибиотики 2.2. Методы 2.2.1. Инкубация Agrobacterium tumefaciens с экссудатами тканей растений 2.2.2. Выделение тотальной ДНК Agrobacterium tumefaciens 2.2.3. Блод-гибридизация тДНК по Саузерну 2.2.4. Трансформация клеток Esherichia coli 3. РЕЗУЛЬТАТЫ 4. ОБСУЖДЕНИЕ 5. ВЫВОДЫ ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЕ СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
    НУК - нафтиуксусная кислота
    БАП - бензиламинопурин
    MS -
    LB -
    тДНК -
    Ар - ампицилин
    Cs - цефотоксин ВВЕДЕНИЕ
    Актуальность работы:
    Свойство бактерий вида Agrobacterium tumefaciens вызывать у растений корончато-галловую болезнь связано с присутствием в их клетках крупных (95-156 мДа) конъюгированных Ti-плазмид (от англ. tumor-inducing - вызывающий опухоль). В процессе идентифицирования растений часть генетического материала Ti-плазмид - тДНК (от англ. transferred DNA - передаваемая) перемещается в растительные клетки и интегрируется в хромосомы, оставаясь частью наследственного материала. Гены тДНК экспрессируются в трансформарованных растительных клетках, нарушают их фитогормональный баланс и определяют синтез специфических ------- соединений.
    Таким образом, агробактерии являются природными "генными инженерами", осуществляющий поразительный по филогенетической дальности перенос генетической информации. На основе агробактерий сконструированы эффективные векторные системы для генетической инженерии растений.
    Агробактириальная трансформация происходит в результате сложного процесса взаимодействия между бактериальными и растительными клетками. В этом процессе одной из решающих стадий является рецепция агробактериями особых сигнальных молекул, присутствующих в экссудатах поврежденных тканей растений. Сигнальные молекулы индуцируют экспрессию генов области vir (агробактериальных Ti-плазмид), контролирующих вырезание тДНК и ее перенос в клетки растений. Агробактерильная трансформация наблюдается у широкого круга голосеменных и двудольных растений, однако, она отмечена лишь у весьма незначительного числа однодольных растений. Одной из причин ограничений агробактериальной трансформации однодольных считается присутствие в их клетках сигнальных молекул, индуцирующих процессинг и перенос тДНК.
    Цель работы:
    В настоящее время имеются противоречивые данные относительно наличия таких сигнальных молекул у однодольных растений. ............