ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССА ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ АДАПТАЦИИ БАКТЕРИЙ К ТЯЖЁЛОЙ ВОДЕ
О. В. МОСИН
Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова, 117571, Москва, просп. Вернадского, д. 86.
Изучен процесс физиологической адаптации различных бактериальных штаммов-продуцентов аминокислот, белков и нуклеозидов, относящимся к различным таксономическим группам микроорганизмов (факультативные и облигатные метилотрофные бактерии - Brevibacterium methylicum и Methylobacilus flagellatum, галофильные бактерии - Halobacterium halobium и бациллы - Bacillus subtilis) к росту и биосинтезу необходимых соединений на средах, содержащих максимальные концентрации тяжёлой воды. В работе сообщается о методе, который заключается в многоступенчатой адаптации бактерий к дейтерию путём рассева их на средах, содержащих возрастающие концентрации 2Н2O и с последующей селекцией отдельных колоний, выросших на этих средах. В результате применения данного подхода среди исследуемых бактерий были отобраны отдельные штаммы, сохранившие высокие ростовые и биосинтетические способности при росте на 2H2О. Представлены данные по росту и адаптации исследуемых штаммов бактерий как на минимальных средах, содержащих в качестве источников дейтерия 2H2О, (2H)метанол так и на комплексных средах, содержащих (2Н)биомассу метилотрофных бактерий B. methylicum, полученную в ходе многоступенчатой адаптации к 2H2O. Для данных штаммов при росте на 2Н2О изучен качественный и количественный состав внутриклеточных аминокислот, сахаров и липидов.
Ключевые слова: тяжёлая вода; aдаптация; биосинтез
ВВЕДЕНИЕ
В настоящее время во всем мире растет интерес к получению природных соединений, меченных стабильными изотопами (2Н, 13С, 15N, 18O и другие), которые необходимы для разнопрофильных биохимических и диагностических целей, структурно-функциональных исследований, а также для изучения процессов метаболизма клетки [1-5]. Тенденции к применению стабильных изотопов по сравнению с их радиоактивными аналогами обусловлены отсутствием радиационной опасности и возможностью определения локализации метки в молекуле методами высокого разрешения: спектроскопией ЯМР [6, 7], инфракрасной [8, 9] и лазерной спектроскопией [10], масс-спектрометрией [11]. Это позволило за последние годы повысить эффективность проведения многочисленных биологических исследований de novo, а также изучать структуру и механизм действия биологически активных соединений (БАС) на молекулярном уровне. Большое значение в этом аспекте имеют природные соединения, содержащие дейтериевую метку, которые удобнее всего получать с использованием микроорганизмов. Именно поэтому разработка путей препаративного получения дейтериймеченых БАС является актуальной задачей для современной биотехнологии. Стоимость биотехнологически полученных изотопномеченых соединений водорода значительно ниже, чем химически синтезированных, что представляет интерес для поиска новых штаммов-продуцентов БАС, устойчивых к высоким концентрациям дейтерия в ростовых средах и для дальнейшего изучения их свойств.
С развитием новых биотехнологических подходов появилась возможность использовать полученные в результате мутагенеза или генной инженерии штаммы-продуценты для направленного синтеза дейтериймеченых соединений [12, 13]. ............
